Onderzoek naar ROS en celdelcyclusarrest in genotoxische effecten van goud nanostaf kern/zilver schil nanostructuren

Samenvatting

Om de genotoxiciteit in de lever geïnduceerd door zilvernanodeeltjes (AgNPs) en zilverionen te begrijpen, werden een ingenieuze goud nanostaf kern/zilver schil nanostructuur (Au@Ag NR) en gehumaniseerde hepatocyte HepaRG cellen gebruikt. De betrokkenheid van oxidatieve stress en celdelcyclusarrest in DNA-en chromosoomschade geïnduceerd door 0,4-20 µg/mL Au@Ag NR werd onderzocht met comet assay, γ-H2AX assay en micronucleustest. Verder werd de distributie van Au@Ag NR geanalyseerd. Resultaten toonden aan dat zowel Ag⁺ als Au@Ag NR DNA-scheuring en chromosoomschade (clastogeniciteit) in HepaRG cellen veroorzaakten en dat de Au@Ag NR bewaard in de kern verder Ag⁺ kan vrijgeven, wat de schade verergeren, hoofdzakelijk veroorzaakt door celdelcyclusarrest en ROS-vorming. De resultaten onthullen de correlatie tussen intracellulaire accumulatie, Ag⁺-vrijgave en potentiële genotoxiciteit van AgNPs.

Inleiding

Zilvernanodeeltjes (AgNPs), 1-100 nm, vertonen brede antimicrobiële eigenschappen door pathogenen te penetreren en innerlijke sulfhydrylgroepen van metabolische enzymen te inactiveren. Ze tonen krachtige bacteriostatische en bactericide effecten in E. coli, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, en worden breed gebruikt als medische coatingen, huishoudproducten en wondverbanden. Bewijs toont aan dat nanodeeltjes de kern kunnen binnendringen en interfereren met DNA-synthese en transcriptie. Eerder werk: enkele intraveneuze dosis 5 mg/kg AgNPs introduceerde opvallende chromosoomschade in beenmergcellen van ratten. Enkele intraperitoneale injectie 10 mg/kg of meer induceerde zowel DNA- als chromosoomschade. Flower et al. suggereerden dat AgNPs bij 50-100 µg/mL DNA-schade binnen 5 minuten kunnen veroorzaken, wat de genotoxiciteit van snel vrijgekomen zilver benadrukt. Gezien het risico op overmatige blootstelling heeft NanoGenotoxicologie (DNA-schade en carcinogeen potentie van engineered nanomaterialen) veel aandacht gekregen.

Hoofdmechanismen AgNP-geïnduceerde genetische schade: overproductie reactieve zuurstofsoorten (ROS), inflammatie, celdelcyclusstoornis. AgNPs kunnen direct interacteren met DNA via oxidatieve schade en interfereren in interfase (DNA-niveau) en mitose (chromosomenniveau), of interacteren met nucleoproteïnen en mitotische spindelapparatuur om celdelcyclus-checkpoints te storen. Echter, of genotoxiciteit van AgNPs deels toe te schrijven is aan de nanodeeltjes zelf of volledig aan vrijgekomen Ag⁺ ionen, is onduidelijk.

Onderzoek naar genotoxiciteit AgNPs is moeilijk door instabiele, ononderbroken vrijgave van zilver in weefsels, wat localisatie van AgNPs en differentiatie nanokern van Ag bemoeilijkt. Onze groep ontwikkelde recent goud nanostaf kern/zilver schil (Au@Ag NR) nanostructuur voor toxiciteitsstudies. De gouden kern is fysiologisch inert in weefsel en dient als interne standaard om Ag⁺-vrijgave van de staaf te monitoren via verandering in Ag/Au-verhouding, gemeten met ICP-MS. Hierdoor kunnen verschillende toxiciteitsbronnen geïdentificeerd worden. Eerder: vrijgekomen Ag⁺ van Au@Ag NR schil veroorzaakte nier-oxidatieve schade, leidend tot morfologische veranderingen en glomerulusfiltratieverlies. Jiang et al. toonden aan dat zowel deeltjes-specifieke activiteit als intracellulaire zilverionvrijgave bijdragen aan toxische respons van granulosacellen. We gebruikten Au@Ag NR als model voor in vivo genotoxiciteit van AgNPs en toonden aan dat clastogeniciteit (niet mutageniciteit) de primaire vorm is van genotoxiciteit geïnduceerd door zowel Ag-schil als vrijgekomen Ag⁺, zonder verschil in toxiciteitspatronen.

Lever is een van de hooforganen voor accumulatie van AgNPs en herkend als doelorgaan voor AgNP-geïnduceerde genotoxiciteit. Eerder werk: na 8 weken intraveneuze administratie één dosis Au@Ag NR bleven zilver (8,26±3,90 µg/g) en goud (80,07±64,72 µg/g) in levers van ratten. Deze studie identificeert rollen van celdelcyclusarrest en reactieve oxidatieve stress op AgNP-geïnduceerde chromosoom- en DNA-schade met Au@Ag NR in humane hepatoma-afgeleide HepaRG cellen. Genotoxiciteitstests (comet assay, γ-H2AX assay, micronucleustest) parallel met oxidatieve radicaal vangstof om ROS-bijdrage te onderzoeken; celdood, celdelcyclus en gerelateerde proteïnen gemeten om mechanismen van DNA-synthese/replicatie storing te verkennen. Intracellulaire accumulatie en distributie Au@Ag NR onderzocht via ICP-MS en TEM om rol nanodeeltjes en vrijgekomen Ag-ionen te differentieren.

Materialen en methoden

Celkweek en behandeling

Humane hepatoma cellijn HepaRG (Thermo Fisher Scientific). Cellen gekweekt in RPMI 1640 met 10% foetale bovine serum (FBS, Australië, Gibco) en 1% penicilline-streptomycine-glutamine (Gibco), 5% CO₂, 37 °C. Behandeling met toenemende concentraties Au@Ag NR gedurende 24 of 72 uur, concentraties gebaseerd op IC₅₀ geschat via cellevensvatbaarheidassay. Voor ROS-rol: 1 mM N-Acetyl-L-cysteine (NAC, Sigma-Aldrich) 1 uur voor behandeling met Au@Ag NR.

ATP celgroei/levensvatbaarheid assay

Cellen gezaaid in 96-wells plaat (5×10³/well). Na 24u incubatie, medium geaspireerd, blootstelling aan verschillende Au@Ag NR concentraties voor 24 of 48 uur. Breed concentratiespectrum, vier wells per behandeling. Cytotoxiciteit via ATP-assay (CellTiter-Glo® 2.0, Promega), meet cel metabolische activiteit door ATP kwantificeren. Luminescente signalen (reflecterend levende cellen) gedetecteerd met VICTOR Multilabel Plate Reader. IC₅₀ geschat als concentratie voor half-maximale levensvatbaarheid (Prism 7). Levensvatbaarheidsratio = RLU_sample / RLU_vehicle × 100%.

Concentratiebepaling zilver en goud in cellen

Celmonsters verteerd in zoutzuur met microwavesysteem. Na verteering: mengsel 1% zoutzuur en zoutzuur. Hoeveelheden Ag en Au bepaald met ICP-MS (NexION300X, PerkinElmer). TEM-analyse voor aanwezigheid Au NR en Au@Ag NR in cel. Celmonsters gefixeerd in 2,5% glutaraldehyde en 2% paraformaldehyde (2u, 4°C), driedmaal gespoeld in fosfaatbuffer (pH 7,4), post-gefixeerd in 1% osmiumtetroxide (2u, 4°C), driedmaal gedestilleerd water, gedeshydrateerd in ethanol (50%, 70%, 90%, 100%), propylene oxide 1:1 en 1:3 verdunning in hars (20-26°C, 2u), polymerisatie door gestage verhitting (35°C 16u, 45°C 8u, 55°C 14u, 65°C 48u). Ultradunne coupes gekleurd met uranylaat en loodcitraat (25 min), geanalyseerd met TEM (H-7650, HITACHI, Japan).

Conventionele en gemodificeerde comet assay

Cellen in 12-wells plaat (2×10⁵/well voor 24u, 3×10⁵/well voor 72u). Waterstofperoxide (200 µmol) als positieve controle (1u). Per monster twee wells voor conventionele en Fpg-behandeling. Conventionele comet assay in alkalische condities (pH>13). Fpg-wells: additionele Fpg-behandeling voor DNA-ontwinding, slides 3×5 min in enzymbuffer (0,1 M KCl, 0,5 mM EDTA, 40 mM HEPES, 0,2 mg/mL BSA). Fpg (New England Biolabs) 1:50.000 gedilueerd in enzymbuffer. 100 µL op gel op microscopieschijven, 30 min incubatie (37°C, vochtkamer). Overige stappen identiek. Comet assays in drievoud. Minimaal 50 cellen per monster gescoord met Nikon Eclipse 80i fluoresentiemicroscoop; Komet 6.0 voor analyse %DNA in staart en olive tail moment (OTM).

Kwantificering γ-H2AX foci door flow cytometrie en high-content screening

Flow cytometrie: cellen in 12-wells (2×10⁵/well 24u, 3×10⁵/well 72u). High-content: 96-wells (6×10³/well 24u, 1×10⁴/well 72u). Positieve controle: 2 µM methyl methanesulfonate (MMS, Sigma-Aldrich) 1u. Celen gespoeld in TBS, gefixeerd 4% paraformaldehyde (15 min, kamertemperatuur). Na wassen TBS: 50 µL ijskoud methanol (30 min, -20°C). Driedmaal TBS spoelen, blokkeringsreagens (TBS met 0,3% Triton X-100, 10% geitserum) 1u. Primair antilichaam (muis anti-fosfo-H2AX Ser139, Millipore) 1:200 in blokkeringsreagens, overnight 4°C. Driedmaal TBS wassen, secundaire antilichaam (Alexa Fluor 488 geit anti-muis, Life Technologies) 1:20 in blokkeringsreagens. Donker, kamertemperatuur, 1u. 2 µg/mL DAPI (20 µL/well). Fluorescentie gemeten met flow cytometrie (FACSCalibur, BD Bioscience) of High Content Analysis System (Operetta CLS, PerkinElmer). Flow: ≥10.000 cellen/groep, drievoudig. High-content: 20 visuele velden/well, ≥5 wells/groep.

Cytokinesis-blok micronucleus cytome (CBMN-cyt) assay

Volgens Fenech et al. Cellen in 12-wells (2×10⁵/well 24u, 3×10⁵/well 72u). Positieve controle: 0,2 µg/mL Mitomycine C (MMC, Tokyo Chemical Industry) 24u. 3 µg/mL cytochalasine B na 24/72u behandeling om cytokinesis te blokkeren, oogst na 40u. Kleuring 5% Giemsa na hypotoniciteit met voorverwarmde 0,075 mol/L KCl en fixatie met 3:1 methanol/azijnzuur. Drie wells/groep, ≥1000 binkernige cellen/well geteld.

Meting MDA, totaal GSH en SOD

Cellen in 12-wells (5×10⁵/well 24u, 3×10⁵/well 72u). Oogst, driedmaal PBS spoelen. Malondialdehyde (MDA) via thiobarbituurzuurmethode (Nanjing Jiancheng). Totaal glutathione (GSH) en superoxide dismutase (SOD) via kits (Dojindo Molecular Technologies). Optische dichtheden gemeten met VICTOR Multilabel Plate Reader.

Flow cytometrische analyse celdelcyclus

Cellen in 6-wells (1×10⁶/well 24u, 5×10⁵/well 72u), gefixeerd 70% ethanol (overnight, 4°C). Driedmaal PBS spoelen, gekleurd met PI/RNase buffer (BD Biosciences) 15 min kamertemperatuur. Celpopulaties G0/G1, S, G2/M onder 20.000 cellen bepaald via FL2 area vs FL2 width. Analyse met flow cytometrie (FACSCalibur) en FlowJo (BD Bioscience), drievoudig.

Flow cytometrische analyse celdood (apoptose)

Cellen in 6-wells (1×10⁶/well 24u, 5×10⁵/well 72u). Tweemaal PBS spoelen, verdund in 500 µL 1× binding buffer (FITC Annexin V Apoptose Detectie Kit I, BD Biosciences) tot ~1×10⁶ cellen/mL. 100 µL verdunning gemengd met 5 µL FITC Annexin V en 5 µL PI. Kleuring 15 min kamertemperatuur. ≥10.000 cellen geanalyseerd voor vroege/late apoptose via FL1H vs FL2H (FACSCalibur, FlowJo), drievoudig.

Western blot analyse

Cellen in 75 cm² fles (1×10⁷/well 24u, 6×10⁶/well 72u). Cellyse met RIPA buffer met protease inhibitor (PMSF). Proteïneconcentratie via BCA kit (Beyotime Biotechnology). Concentraties aangepast met RIPA buffer, gedatureerd 95°C (3 min). Elektroforese op 12% SDS-polyacrylamidgegel, transfer naar nitrocellulose membraan (Millipore). Blokkeren 5% magere melk (30 min), incubatie met primair p53 (SC-137174, Santa Cruz), p21 (SC-6246, Santa Cruz), β-actine (sc-47778, Santa Cruz) en secundaire antilichamen (geit anti-muis IgG(H+L)-HRP, SE131, solabio). Expressieniveaus gevisualiseerd via versterkte chemiluminescentie (ECL) en geanalyseerd met ImageJ (NIH).

Statistische analyses

Data als gemiddelde ± SEM. Eénrichtings ANOVA voor significantie tussen negatieve controle en behandelde groepen, gevolgd door Dunnett meervoudige vergelijkingstest (SPSS v22, IBM). Significantie bij P<0,05. Figuren met GraphPad Prism 7 (Windows).

Resultaten

Karakterisering Au NR en Au@Ag NR

Goud nanostaven (Au NRs) en Au@Ag NR geëngineerd, bereid en gekarakteriseerd zoals eerder beschreven. Gemiddelde diameters/lengtes: Au NRs 15,0±2,5 nm / 66,7±2,5 nm; Au@Ag NRs 26,2±3,0 nm / 72,7±8,9 nm. Ag-schil dikte ~5 nm. Zeta-potentialen PDDAC-gecoate Au NRs en Au@Ag NRs in water: 37,7±1,6 mV en 52,5±1,4 mV. Ag/Au gewichtsverhouding bereide Au@Ag NR: 2,3. Resultaten Fig 1.

Cellevensvatbaarheid

Cytotoxiciteit Au@Ag NR tegen HepaRG via ATP-assay (Tabel 1). Blootstelling 24/48u bij 0,125-160 µg/mL. Significant cytotoxische effecten in tijds- en dosisafhankelijke manier na 24/48u, IC₅₀ 20 µg/mL (24u) en 6 µg/mL (48u) (GraphPad Prism 7.0). Overweegde cytotoxiciteit: behandelperiodes 24u en 72u, concentraties 0,8, 4, 20 µg/mL. Au NR als inerte controle (Au-inhoud gelijk aan 20 µg/mL Au@Ag NR = 16 µg/mL). 1 mM NAC pre-behandeling in Au@Ag NR+NAC groep als controle voor oxidatieve stressrespons (20 µg/mL Au@Ag NR).

Celdistributie Au NR en Au@Ag NR

Distributie Au en Ag in HepaRG cellen via ICP-MS (Tabellen 2,3). Ag-inhoud toegenemend dosis-afhankelijk. Antioxidant NAC als radicaalvanger kan cellulaire opname nanodeeltjes beperken: minder Ag-inhoud ondanks zelfde Au@Ag NR concentratie (20 µg/mL). Daling Ag/Au verhouding van 24 naar 72u duidt op continue vrijgave Ag⁺ uit schil Au@Ag NR. Cellulaire opname Ag veel groter dan Au (Tabel 4). TEM: meeste Au NR en Au@Ag NR bewaard in cellen als agglomeraten. Nanostafstructuren duidelijk zichtbaar in cellen na blootstelling Au NR of Au@Ag NR, zonder de kern binnen te dringen (Fig 2).

DNA-schade

DNA-schade door Au@Ge NR geëvalueerd via comet assay en γH2AX assay (Fig 3). Comet assay: 0,8-20 µg/mL Au@Ag NR introduceerde significante DNA-schade. Na 24/72u blootstelling: zowel %staart DNA als OTM toegenomen in tijds- en concentratie-afhankelijke manier. DNA-schade geassocieerd met oxidatieve stress waargenomen bij 20 µg/mL Au@Ag NR via Fpg-geïncorporeerde comet assay (Fig 3a,b). Voor evaluatie dubbelstrengbreuken (hogere correlatie met kankerontstaan): γ-H2AX-positieve cellen en gemiddelde fluorescentie-intensiteiten geanalyseerd. Na 24u: geen verschil tussen groepen in γ-H2AX-positieve cellen. Maar 4 µg/mL Au@Ag NR groep: significante toename na 72u. Significante toename fluorescentie-intensiteiten in alle Au@Ag NR groepen na 72u vs voertuigcontrole (Fig 3c-e, P<0,05).

Chromosoomschade

Micronucleusvorming = biomarker chromosoomschade (kritischere schade dan DNA-breuk). Ratio binkernige cellen met micronucleus gescoord (Fig 4c). Au@Ag NR verhoogde micronucleusvorming concentratie-afhankelijk. Na 24u: ratios 4 µg/mL = 1,133±0,145%, 20 µg/mL = 1,567±0,318%, beide significant hoger dan controle. Na 72u: 4 µg/mL = 1,767±0,233% (significant > controle); 20 µg/mL = 2,167±0,252% (significant > controle en 16 µg/mL Au NR = 0,700±0,153%). Geen verschil tussen 20 µg/mL Au@Ag NR+NAC en controle, wat participatie ROS in chromosoombreuk door Au@Ag NR suggereert.

Effecten Au@Ag NR op ROS-vorming

Rol ROS in DNA/chromosoomschade verkend via MDA, GSH, SOD (Fig 5). Significante toename MDA (P<0,05) na 20 µg/mL Au@Ag NR voor 24/72u (Fig 5a). GSH en SOD niveaus significante afname (P<0,05) in tijds- en concentratie-afhankelijke manier (Fig 5b,c). Resultaten wijzen op onbalans oxidatie/antioxidatie door Au@Ag NR blootstelling.

Effecten Au@Ag NR op celdelcyclus en apoptose

Na 72u blootstelling: toename cellen in G2/M-fase in 4 µg/mL (32,63±1,77%), 20 µg/mL (32,27±2,17%), Au@Ag NR+NAC (32,97±4,25%), alle significant > controle (22,37±0,92%) (Fig 6a,b). Celdood na 72u: late apoptose 20 µg/mL Au@Ag NR = 78,90±1,19%, 20 µg/mL Au@Ag NR+NAC = 70,20±4,50% (Fig 6c,d). Au@Ag NR induceert meer late dan vroege apoptose; NAC verlicht late apoptose.

Expressie p21 en p53 via Western blots: vergelijkbaar patroon. p53 en p21 expressie in 4 en 20 µg/mL Au@Ag NR groepen significant toegenomen (P<0,05); significant afgenomen in 20 µg/mL Au@Ag NR+NAC vs 20 µg/mL Au@Ag NR (P<0,05, Fig 6e-h). p53 = kernmolecuul medeerder G2/M checkpoint activatie bij DNA-schade; p21 = p53-afhankelijke celdelcyclusremmer. Au@Ag NR kan DNA-replicatie interfereren en DNA-reparatie hinderen via celdelcyclusarrest.

Discussie

Rollen vrijgekomen Ag⁺ en AgNPs in genotoxiciteit nog onduidelijk. Eerder werk: Ag⁺ belangrijkste bron toxiciteit, maar nanodeeltjes ook hoog toxisch. AgNPs bijdragen genotoxiciteit via hydroxylradicaalvorming. Ergernis chromosoomschade, oxidatieve stress, apoptose door AgNPs vs Ag⁺ alleen → verschillende pathways betrokken. Au@Ag NR als model voor vormen/distributies AgNPs in cellen; intracellulaire Ag/Au via ICP-MS. Bereide Ag/Au gewichtsverhouding = 2,3. Na 24u blootstelling: scherp gestegen naar 16,5 in cellen met Au@Ag NR → grote hoeveelheid Ag vrijgekomen uit schil binnen 24u. Na 72u: Au/Au verhouding gedaald tot 1,7 → Ag⁺ vrijgekomen uit cel, nanostaf hoofdvorm Au@Ag NR in cel op dat moment. Conclusie: na celbinnendringing Au@Ag NR lost Ag⁺ snel op uit schil (binnen 24u) en geleidelijk vrij naar extracellulaire omgeving, terwijl Au@Ag NR zelf langer in cel blijft.

Oxidatieve stress = belangrijke toxicologisch mechanisme nanodeeltjes. NAC = thiol, mucolytisch middel, voorloper L-cysteine die glutathione verlaagt. NAC = bron sulfhydrylgroepen, uitoefent ROS-vanger activiteit via interactie met OH• en H₂O₂. In deze studie: GSH en SOD significant afgenomen na blootstelling Au@Ag NR, MDA toegenomen concentratie- en tijdsafhankelijk → Au@Ag NR introduceert oxidatieve stress in cellen.

Potentieel Ag en Au@Ag NR interfereren met genetisch materiaal onderzocht via genotoxiciteitstests. NAC co-cultuur met Au@Ag NR verbeterde ROS-vorming, wat participatie oxidatieve stress in genotoxiciteit ondersteunt. Comet en γ-H2AX assays bevestigen DNA-interactie en schade door Au@Ag NR. Reparatie-endonucleasa Fpg in comet assay identificeert oxidatieve DNA-schade. Fpg herkent geoxideerde pyrimidines, verwijdert geoxideerde purines (bijv. 8-hydroguanine), creëert apurinische/apyrimidinische sites die gaten in DNA-strengen introduceren. Oxidatieve stress-geïnduceerde DNA-breuken gedetecteerd door additionele comet assay. Mei et al.: 5 nm AgNPs induceerden oxidatieve laesie-specifieke DNA-schade via hOGG1, EndoIII, Fpg in comet assay. Li et al.: PVP- en silica-gecoate AgNPs (15-100 nm, 10-80 nm) verhoogden DNA-breuken in muislevercellen met hOGG1/EndoIII. γ-H2AX foci = vroege cellulaire respons op genotoxische stress, meest gevoelige/biomarker voor dubbelstrengbreuken (DSBs). In deze studie: γ-H2AX foci significant toegenomen na 24u, verdere toename na 72u. Reductie in 20 µg/mL groep mogelijk door cytotoxiciteit bij hogere concentratie. Vergelijkbare resultaten voor AgNPs met verschillende coatingen. Au@Ag NR induceert chromosoomschade in HepaRG (micronucleusratios significant verhoogd). Consistent met eerdere studies: AgNPs verhoogden micronucleus in HaCaT en TK6 cellen. NAC inhibitie micronucleusvorming door Au@Ag NR. Samen: oxidatieve stress deelneemt aan AgNP-geïnduceerde clastogeniciteitsrisico in vitro.

Eerder onderzoek: celdelcyclusarrest en cytotoxiciteit geïnduceerd door AgNPs. Met langere blootstellingstijd: impact op celdelcyclus/apoptose versterkt → verergeren cytotoxiciteit/genotoxiciteit. Normaal: celdelcyclus-checkpoints (bijv. G2/M) geïnitieerd bij DNA-schade → voorkomen dat cel in mitose (M-fase) gaat. G2/M arrest = toenemend percentage cellen gehinderd in G2-fase voor DNA-reparatie. Succesvolle reparatie → mitose; fatale schade → irreversibele G2/M arrest en apoptose. Waargenomen: Au@Ag NR arresteert meerderheid HepaRG in G2/M, induceert late apoptose, verhoogt p53/p21 expressie (belangrijke proteïnen celdelcyclusregulatie). p53 kan ook apoptose induceren bij onherstelbare DNA-schade; p21 kan indirect deelnemen aan apoptose via celdelcyclusarrest in p53-afhankelijk pad via down-regulatie nucleair eiwit ICBP90 voor DNA-replicatie/celdelcyclusregulatie. Apoptose en G2/M arrest via p53/p21 systeem gerapporteerd in HepG2 na knoflookextract. Inferentie: oxidatieve stress-geïnduceerde DNA/chromosoomschade faciliteren p53/p21 expressie → celdelcyclusarrest. Verlengen blootstellingstijd Au@Ag NR aan DNA/chromosoom tijdens replicatie kan genotoxiciteit/apoptose verergeren.

Conclusie

Genotoxiciteit geïnduceerd door AgNPs kan toegeschreven worden aan oxidatieve stress geïnduceerd door nanodeeltjes en vrijgekomen ionen. Deze studie gebruikte Au@Ag NR als model om distributie en vrijgavegedrag Ag na celbinnendringing te bepalen. Rekening houdend met uiteenlopende vormen Au@Ag NR in cel: na blootstelling lost Ag⁺ snel op uit zilveren schil. Ag⁺ en Au@Ag NR introduceren cytotoxiciteit en genotoxiciteit (clastogeniciteit) in cellen; Au@Ag NR bewaard in kern kan verder Ag⁺ vrijgeven om schade te verergeren, hoofdzakelijk veroorzaakt door celdelcyclusarrest en ROS-vorming (samenvatting Fig 7). Collectief onthullen deze data de correlatie tussen intracellulaire accumulatie, Ag⁺-vrijgave en potentiële genotoxiciteit van AgNPs.